异丙醇镱(III)供应商,6742-69-4,赛拉嗪供货商,呫吨-9-羧酸工厂价格,黄嘌呤核苷现货直销,巴氯酚生产厂家-上海阿拉丁生化科技股份有限公司

联系我们

  • 联系人:阿拉丁客服部
  • 电话:400-620-6333
  • 传真:86-21-50323701
  • 邮箱:sale@aladdin-e.com
  • 地址:新金桥路196号6楼
首页 >  新闻动态 >  阿拉丁蛋白定量试剂

阿拉丁蛋白定量试剂

发布时间:2020-06-01

阿拉丁蛋白定量试剂

蛋白质浓度测定常用比色法。其中,BCA法和Bradford法定量是最常用的蛋白浓度测定方法。每种蛋白质定量方法都有其局限性,在选择蛋白质定量方法时,最需要考虑的特性是灵敏度、与样品中常见物质的相容性(如洗涤剂、还原剂、抑制剂、盐和缓冲液)、标准曲线线性和蛋白质之间的差异等。

蛋白定量BCA法和Bradford法对比

 BCA法Bradford法
测定范围20–2000 μg/mL100-1500 μg/mL
检测原理在碱性的条件下,蛋白质将碱性Cu(II)还原为Cu(I)。两分子的二辛可宁酸(BCA)螯合一个Cu(I),形成紫色的反应复合物。该复合物的水溶液在562nm处显示强烈的吸光性在试剂的酸性环境中,蛋白能与考马斯染料结合。这导致染料的最大吸收发生位移,从红棕色形式转化为蓝色形式。蛋白-染料结合物在595nm波长下吸收最大
优点兼容大多数去垢剂蛋白定量方法中,测定最快速,方法最简单,且在室温下进行
蛋白质间差异性小于Bradford法与大多数盐离子、溶剂、缓冲剂、硫醇、还原性物质和金属螯合剂兼容
缺点能还原铜离子的物质也能造成显色,影响定量的准确性与通常用于溶解膜蛋白的高浓度去垢剂不兼容
与铜离子螯合的试剂,DTT 等常见还原剂和特定的单个氨基酸也会在BCA检测中显色(半胱氨酸或胱氨酸、酪氨酸和色氨酸)与BCA法相比,蛋白质之间的差异性较大
需要孵育温度以及时间的消耗-

BCA法

试剂配制

1、BCA试剂

A) 试剂A:分别称取1%(w/v)BCA ,2%(w/v)Na2CO3·H2O,0.16%(w/v)Na2C4H4O6·2H2O,0.4%(w/v)NaOH,0.95%(w/v)NaHCO3,用NaOH或固体NaHCO3调节pH值至11.25。

B)试剂B:4%(w/v)CuSO4·5H2O。

C)BCA试剂:试剂A:试剂B=50:1,混合均匀。

2、牛血清蛋白标准(BSA)标准蛋白质母液:配制成5mg/ml的BSA标准溶液(配制溶液需与待测样品溶液保持一致)。

实验操作

1、配制标准曲线待测样品:用标液配置溶液稀释BSA母液10倍,至浓度为0.5mg/ml。取96孔酶标板,按下表加入试剂

序号

1

2

3

4

5

6

7

8

0.5mg/mlBSA溶液(μl)

0

1

2

4

8

12

16

20

标液配置溶液(μl)

20

19

18

16

12

8

4

0

蛋白质浓度(mg/ml)

0

0.025

0.05

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

每份标样分别加入BCA试剂200μl。

2、配制待测样品:准确吸取20μl样品溶液于酶标孔中,加入BCA试剂200μl。如待测样品需稀释,稀释倍数需根据原始样品浓度进行适当调整,一般保证稀释后样品浓度标曲浓度范围内。

3、样品处理:轻摇,于37℃保温30-60min,冷却至室温。

4、测定:以空白为对照,在酶标仪上562nm处比色,以牛血清白蛋白含量为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。以标准曲线空白为对照,根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。


BCA法试剂

产品号名称级别Cas规格
B1076582,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠(BCA)98%979-88-4 1g,5g,25g
S113834碳酸钠,一水ACS5968-11-61g,50g,250g
S111691酒石酸钠二元二水合物AR, ≥99%6106-24-7100g,500g
S111518氢氧化钠AR,96%,颗粒状1310-73-2500g,12*500g,20*500g
S112331碳酸氢钠AR,≥99.8%144-55-8500g,12*500g,20*500g,10Kg
C112396硫酸铜,五水AR,99%7758-99-8500g,20*500g
A119741牛血清白蛋白含量标准物质98%9048-46-8 200mg

Bradford法

试剂配制

1、染色剂:0.01%考马斯亮蓝G250,8.5%磷酸和4.75%乙醇。

2、牛血清蛋白标准(BSA)标准蛋白质母液:配制成10mg/ml的BSA标准溶液(配制溶液需与待测样品溶液保持一致)。

实验操作

1、配制标准曲线待测样品:

A)在BSA母液中加入标液配置溶液,配置一组浓度分别为0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的BSA溶液。

序号

1

2

3

4

5

6

10mg/mlBSA母液(μl)

0

20

40

60

80

100

标液配置溶液(μl)

1000

980

960

940

920

900

蛋白质浓度(mg/ml)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

B)对于上述配制好的BSA溶液,再用P标液配置溶液分别稀释10倍。

序号

1

2

3

4

5

6

步骤A配置完成的BSA溶液(μl)

100

100

100

100

100

100

标液配置溶液(μl)

900

900

900

900

900

900

蛋白质浓度(mg/ml)

0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

C)分别移取50μl步骤B中配制好的一组待测标准BSA溶液,滴加到孔板中,再分别加入200μl考马斯亮蓝G250。静置10min后检测。

2、配制待测样品:准确吸取50μl样品溶液于孔板中,加入考马斯亮蓝G250试剂200μl。静置10min后检测。如待测样品需稀释,稀释倍数需根据原始样品浓度进行适当调整,一般保证稀释后样品浓度在0.1-1.0mg/ml。

3、用酶标仪在595nm波长下测定溶液的吸光度。以BSA含量为横坐标,以吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。以标准曲线空白为对照,根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。


Bradford法试剂

产品号名称级别Cas规格
B104237考马斯亮蓝G250AR6104-58-15g,10g,25g,100g,200g
P112024磷酸AR, ≥85 wt. % in H2O7664-38-2 500ml,12*500ml,2.5L
A112717乙醇(95%)AR,95.0%64-17-5 500ml,12*500ml,20*500ml,4*5L,10L,25L
P196987PBS缓冲液-500ml
P196986PBS缓冲液10×-100ml,500ml,1L
A119741牛血清白蛋白含量标准物质98%9048-46-8 200mg


地址:新金桥路196号6楼 电话:400-620-6333 传真:86-21-50323701 联系人:阿拉丁客服部
XML    上海阿拉丁生化科技股份有限公司 版权所有© 2020 技术支持: 盖德化工网   Guidechem  

联系方式
手机:
电话:400-620-6333
Q Q:
二维码扫描访问