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阿拉丁细胞裂解液选型与配制

发布时间:2020-12-14

阿拉丁细胞裂解液选型与配制

       细胞裂解液是以去污剂为基础、针对细胞裂解应用、成分优化的缓冲液和试剂。对于不同细胞类型、蛋白定位、以及下游应用,需要不同的细胞裂解液进行有效的细胞裂解和蛋白提取。

去污剂主要类型及其作用

       根据去污剂类型、蛋白定位、及目的蛋白性质来确定细胞裂解液的种类。


去污剂主要类型及其作用

类型带电情况作用应用举例
离子型
(变性去污剂)
带电荷的
阴离子性或阳离子性的
破坏蛋白活性、功能及蛋白间相互作用力总蛋白提取
SDS-PAGE
SDS
ETMAB
非离子型
(非变性去污剂)
不带电荷较少破坏活性及功能,可维持蛋白间作用力酶学检测
免疫检测
Triton X-100
Tween 20
NP-40
两性离子型具有正电荷和负电荷的基团
但净电荷为零
兼具离子型和非离子型去污剂的特点,能破坏蛋白质间相互作用
CHAPS
CHAPSO


根据蛋白定位不同推荐的裂解液种类

蛋白定位

全细胞

细胞质
(可溶性蛋白)

细胞质
(细胞骨架等不溶性蛋白)

细胞膜

细胞核

线粒体

裂解液种类

NP-40或RIPA

Tris-HCl

Tris-Triton

NP-40或RIPA

RIPA

RIPA

 

常用细胞裂解液

#RIPA缓冲液

       最初以其开发的测定方法(放射免疫沉淀测定法)来命名,是两种离子去污剂和一种非离子去污剂的Tris缓冲液,也是哺乳动物细胞或软组织裂解和蛋白提取的常用选择。

常用配方:

25 mM Tris-HCl, pH 7.6

150 mM NaCl

1% NP-40

1%去氧胆酸钠

0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)

兼容应用:

       BCA及去污剂兼容型的Bradford试剂蛋白浓度测定、SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹、ELISA及纯化等。

 

#IP缓冲液

       是一种修饰型的RIPA缓冲液(不含SDS),可有效溶解细胞蛋白,但无法释放基因组DNA或破坏蛋白复合物,可兼容下游的免疫沉淀或者亲和吸附的应用。

常用配方:

25 mM Tris-HCl, pH 7.4

150 mM NaCl

1% NP-40

1% mM EDTA

5% 甘油

兼容应用:

       BCA及去污剂兼容型Bradford试剂蛋白浓度测定、蛋白质免疫印迹、ELISA、免疫沉淀及报告基因检测。

 

#NP-40缓冲液

       NP-40是一种非离子型聚氧乙烯表面活性剂,常作为细胞裂解缓冲液或其他用于提取和溶解蛋白质的溶液的组分。

常用配方:

150mM NaCl

1.0% NP-40

50mM Tris-HCl,pH值8.0

兼容应用:

       BCA及去污剂兼容型Bradford试剂蛋白浓度测定、蛋白质免疫印迹、ELISA、免疫沉淀。

 

#Tris-Triton缓冲液

       非离子型表面活性剂,常用作细胞裂解缓冲液或其他用于提取和溶解蛋白质的溶液。Trition X-100效果介于NP-40和SDS之间。

常用配方:

10mM 三羟甲基氨基甲烷(Tris),pH值7.4

100mM NaCl

1mM EDTA

1mM EGTA

1% Triton X-100

10% 甘油

0.1% SDS

0.5% 去氧胆酸钠

兼容应用:

       BCA及去污剂兼容型Bradford试剂蛋白浓度测定、蛋白质免疫印迹、ELISA、免疫沉淀。


产品列表

产品号产品名称规格Cas包装
C111538 氯化钠用于细胞和昆虫细胞培养,≥99.5%(T)7647-14-5500g,2.5kg
N105507NP-40~10% in H2O9016-45-9 25ml,100ml,
500ml,5L
T109026 Triton X-100生化试剂级9002-93-1100ml,500ml,1L,4L
T105291三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris HCl)用于分子生物学和细胞培养,≥99.0%(AT)1185-53-1100g,500g
S104198脱氧胆酸钠98%302-95-425g,100g,
250g,500g
S118591十二烷基硫酸钠(SDS)分子生物学级,≥98.5% (GC)151-21-3 25g,100g,
500g
T110602三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)细胞培养级,≥99.9%(T)77-86-15kg
E112489乙二胺四乙酸(EDTA)99%,用于细胞培养60-00-4100g,500g
E1044343,6-二氧杂-1,8-辛二胺四乙酸(EGTA)用于分子生物学,≥99.0%67-42-5 25g,100g,
500g
G118851甘油无菌,for molecular biology, ≥99%56-81-5100ml


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