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阿拉丁SDS-PAGE蛋白电泳试剂

发布时间:2020-05-27

阿拉丁SDS-PAGE蛋白电泳试剂

十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种常用的蛋白电泳。经典SDS-PAGE蛋白电泳凝胶,由两种不同浓度的丙烯酰胺溶液形成的不连续凝胶(浓缩胶和分离胶)。

1、凝胶材质

聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺单体聚合而成的聚合物,通常与双丙烯酰胺或N,N'-亚甲基双丙烯酰胺结合使用。 交联剂双丙烯酰胺含有两个单位通过亚甲基桥连的丙烯酰胺。 聚合是被TEMED催化(N,N,N,N-四甲基乙二胺)的自由基反应-通常由过硫酸铵(APS)引发。在既定温度下,APS和/或TEMED的浓度决定了聚合速率。
蛋白电泳,通常采用30%或30%+(%T)的聚丙烯酰胺凝胶。通过改变基质的百分比来调整孔径大小,从而有效分离不同大小的蛋白。聚丙烯酰胺凝胶的含量与蛋白大小成反比。

分离胶中丙烯酰胺比例和分离蛋白大小的关系

丙烯酰胺比例8%10%12.5%15%20%
分离蛋白范围25-200 KDa15-100 KDa10-70 KDa6-60 KDa4-40 KDa

2、变性剂

SDS是一种阴离子去污剂。SDS-PAGE蛋白电泳中,SDS与蛋白质紧密集合,将蛋白质的氢键、疏水键打开,引起蛋白质构想的改变,其所带的电荷与蛋白质有大大的差异,因此消除或掩盖了蛋白质本身的电荷。电泳时的蛋白的迁移率就不在受蛋白质原有的电荷和形状的影响,而只与蛋白质大小有关。

常用SDS-PAGE蛋白电泳分离胶和浓缩胶配置表

溶液成分(mL)5%浓缩胶不同浓度的分离胶


6%8%10%12%15%
6.82016.713.3105
30%Acr-Bis(29:1)1.71013.316.72025
1M Tris(pH=8.8)-1919191919
1M Tris(pH=6.8)1.25-----
10% SDS0.10.50.50.50.50.5
10% 过硫酸按0.10.50.50.50.50.5
TEMED0.010.040.030.020.020.02
总体积(mL)105050505050

 

凝胶配置试剂

产品号名称级别Cas规格
A108470丙烯酰胺电泳专用级79-06-125g,100g,500g
M104026N,N′-亚甲基双丙烯酰胺电泳级, ≥99.0% (T)110-26-9 25g,100g,500g
T105496四甲基乙二胺(TEMED)用于电泳,99%110-18-9 25ml,100ml
A112447过硫酸铵APS99.99% metals basis7727-54-025g,100g,500g
S108346十二烷基硫酸钠(SDS)电泳专用,≥98.5% (GC)151-21-325g,100g,500g,2.5Kg

3、电泳缓冲液

经典SDS-PAGE蛋白电泳缓冲体系(Tris Glycine)工作原理:

上层浓缩胶,由较低浓度丙烯酰胺溶液形成(一般丙烯酰胺浓度为4-6%)。浓缩胶体系中的氯离子(Cl-)作为先导离子,以较快的速度向正极迁移。在其后面形成一个电导较低、电位梯度较陡的区域,加快了蛋白质和甘氨酸离子(Gly)的迁移。由于浓缩胶中的pH较低(一般pH=6.8),甘氨酸的负离子效应不明显,作为尾随离子,迁移较慢。所以,进入分离胶之前,蛋白堆积在氯离子、甘氨酸离子之间,有利于提高电泳的分辨率。

进入下层分离胶后,pH升高(分离胶通常pH=8.8),使甘氨酸解离成负离子效应增加,使甘氨酸的迁移超过蛋白质。另外,由于分离胶中的丙烯酰胺浓度明显高于浓缩胶,一般丙烯酰胺浓度为8-15%。蛋白质便在一个较均一的pH和电压梯度环境中,按其性质分离。在非变性蛋白凝胶电泳中,按荷质比分离蛋白。在SDS-PAGE变性蛋白凝胶电泳,按相对分子质量大小分离蛋白质。


Tris Glycine缓冲体系电泳缓冲液组分

组分Tris base甘氨酸SDS去离子水(pH 8.3)
浓度25 mM192mM0.10%

 

电泳缓冲液配置试剂

产品号名称级别Cas规格
T110601三(羟甲基)氨基甲烷分子生物学级,≥99.9%(T)77-86-1 500g,1Kg
A110752甘氨酸用于电泳,≥99%56-40-6500g,2.5Kg
S108346十二烷基硫酸钠(SDS)电泳专用,≥98.5% (GC)151-21-325g,100g,500g,2.5Kg

除了(Tris-甘氨酸)缓冲系统,聚丙烯凝胶蛋白电泳缓冲系统也衍生出了一系列进化缓冲系统。Tricine缓冲系统中,用Tricine替代了传统Tris-甘氨酸系统中的甘氨酸,使得低分子量蛋白(2-20 kDa)电泳具有更高的分辨率。Tris-醋酸盐凝胶可以用于大分子量蛋白(<500 kDa)的分离。

4、蛋白染料

考马斯亮蓝R250染料是SDS-PAGE中最常用的蛋白染色之一。蛋白质-染料复合物在549纳米处有最大的吸收。每个正电荷氨基酸约1.5-3个考马斯亮蓝R250分子将被结合。灵敏度在200-400ng左右。而考马斯亮蓝G250主要应用是Bradford法(测定蛋白质浓度),但也可以对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行染色。


蛋白染料

产品号名称级别Cas规格
C298550考马斯亮蓝染色液--100ml
C298551考马斯亮蓝快速染色液0.1%(W/V)-100ml
B105005考马斯亮蓝R250电泳级,≥90 %(HPLC)6104-59-2 5g,25g,100g
B104241考马斯亮蓝G25070%,用于电泳6104-58-1 5g,10g,50g,250g
C298552考马斯亮蓝脱色液
(40%甲醇,10%冰醋酸)
--100ml

5、上样缓冲液

上样缓冲液通常包含密度成分、SDS、染料、缓冲体系。密度成分帮助样品沉入凝胶孔中,SDS是一种阴离子去污剂,染料则用于指示电泳的进展。对于还原蛋白电泳,还需在上样缓冲液中加入还原剂,降低二硫键的生成。

组分Tris HCl甘油SDS溴酚蓝二硫苏糖醇(DTT)去离子水(pH 6.8)
浓度63 mM10%2%0.00%0.1 M(还原蛋白电泳)

 

上样缓冲液组分

产品号名称级别Cas规格
T105291三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris HCl)用于分子生物学和细胞培养,≥99.0%(AT)1185-53-1100g,500g
G118851甘油无菌,for molecular biology56-81-5100ml
S108346十二烷基硫酸钠(SDS)电泳专用,≥98.5% (GC)151-21-325g,100g,500g,2.5Kg
B109645溴酚蓝Indicator115-39-910g,25g,50g
D104861DL-二硫苏糖醇(DTT)用于电泳,≥99%3483-12-31g,5g,25g


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